EB病毒（EBV）是一种常见的DNA病毒，属γ疱疹病毒。其感染与多种疾病的发生密切相关，常见的如传染性单核细胞增多症（IM）、EB病毒相关嗜血细胞综合征（EBV-HLH）、慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）以及一些肿瘤相关疾病（如鼻咽癌、Burkett‘s淋巴瘤及何奇金淋巴瘤等）。研究发现，EBV在人群中的感染率超过95%，也就是说人群普遍易感。EBV感染的诊断方法主要包括EBV抗体检测（主要用于区分原发感染或既往枉然），EBV核酸（DNA）检测以及EBERs（主要用于EBV感染的组织细胞定位）。本文主要介绍EBV DNA检测的原理及方法。

1.EBV-DNA检测原理

EBV DNA检测原理是采用核酸释放剂快速裂解、释放样本中的EBV-DNA，利用针对EBV核酸保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针，配以PCR反应液，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现EBV-DNA的快速定量检测。

2.EBV-DNA检测方法

2.1 样本采集

针对不同的EBV相关疾病类型，所选择的最适样本类型是不一样的。如血清/血浆主要适用于EBV原发感染，EBV相关肿瘤的筛查等，而全血样本则主要适用于免疫缺陷患者或器官移植后患者。不管血清/血浆还是全血，都属血液样本，都需经过专业医护人员行静脉穿刺后采集样本。样本采集后需及时处理（如离心分离血清）并送达实验室检测，若短时间内不能完成检测，需将样本存储于合适的条件下保存。

2.2 核酸提取

试验人员在做好必要的防护措施（如戴帽子、口罩等）后进入PCR实验室，按照规范的操作规程进行各步骤试验，首先在试剂准备间进行扩增反应液的配制并分装于PCR反应管内，其次在样本处理区进行核酸提取。随着科技的进步，现在的PCR实验室大多采用磁珠法进行核酸提取，其原理是利用机器内磁棒架上之磁棒，将吸附有核酸的磁珠移动到不同的试剂孔内，再利用套在磁棒外层的搅拌套，反复快速搅拌液体，使其混和均匀，经过细胞裂解、核酸吸附、清洗与洗脱，进而得到高纯度的DNA/RNA核酸分子。最后将提取的核酸加入配制好的扩增反应液中，将PCR反应管通过传递窗带入PCR扩增间。

2.3 PCR扩增

PCR（Polymerase Chain Reaction）的中文全称是聚合酶链反应。它是一种能在体外模仿细胞内核酸复制的过程的生物技术,即在体外特异地扩增一段特定序列核酸。PCR过程一般包括变性-退火-延伸三个步骤。EB病毒DNA检测中采用的是实时荧光定量PCR技术（qPCR）。所谓qPCR是指在PCR反应体系中，加入示踪产物的荧光分子，以内参或外参作为标准，利用荧光信号的累积对PCR反应过程实时监控，最终通过标准曲线对初始模板进行定量的方法。

3. 结束语：

EB病毒DNA检测在临床应用非常广泛，可准确反映机体内EBV的复制情况，用于疾病筛查、诊断、病情监测及疗效判定等。EB病毒DNA检测采用的是实时荧光定量PCR技术，该方法具有灵敏度高、特异性强的特点，可以对目标DNA进行指数级扩增。也正是因为此，PCR实验室极易造成污染，尤其是扩增产物污染。为了避免实验室内的污染，在试验操作中需注意各区（试剂准备区/核酸提取区/扩增区）在物理空间上相对独立，无空气直接流通；各区物品必须专用，不可混用；定向负压系统控制空气流动方向。

以上图片来自于网络，如有侵权，请联系删除。