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诺如病毒核酸检测的流程是怎样?
2024-01-30 16:46:31
作者:王江莲
作者单位:崇左市疾病预防控制中心 

一、什么是诺如病毒

诺如病毒是人类杯状病毒科(Human Calicivirus, HuCV)中的一种病毒,能引发呼吸道疾病和胃肠道疾病,常见症状为恶心、呕吐、发热、腹痛、腹泻,部分患者头痛、畏寒、肌肉酸痛等。儿童多见呕吐、腹泻,粪便为稀水便或水样便,一般持续1-3天。其特点为致病力度强、感染剂量低,只需18-100个病毒即可导致病发。很多病毒通多水、食品、物品接触等实现传播。冬春季节为诺如病毒的高发季节,易感人群普遍。同时病毒存活时间长,对消毒剂、冷冻、加热等因素都不敏感。在60摄氏度的较高温度中能存活30分钟同时具备传染性。对酸性稳定,在pH2.7的环境中仍能存活3个小时。另外,诺如病毒对乙醚不敏感,4摄氏度的温度下使用20%的乙醚针对病毒进行防治处理,在18-24小时后,病毒仍具备传染性。

二、诺如病毒检测方式

目前对诺如病毒的检测方式有两种,一种是核酸检测,一种是抗体检测。核酸检测是采集患者的呼吸道、血液或粪便等样本,对其中的RNA进行聚合酶链式反应(PCR)反应,从而检测出带有病毒的遗传物质。抗体检测是对人体的血液进行样本采集,通过对抗体的检测判断患者是否感染诺如病毒。

本文主要针对诺如病毒的核酸检测方法进行阐述。

三、诺如病毒核酸检测流程

1.核酸检测注意事项

在样本采集时要对采集工具和样本盛放器物进行消毒、密封存储,同时医

护人员佩戴好防护用具避免被感染。样本之间单独放置避免交叉感染。在进行样本采集时患者有可能会感觉到身体不适,但是需要克制、耐心协助医护人员完成样本采集工作。

2.诺如病毒核酸检测流程

(1)样本采集

对象样本采集

针对采集对象的呼吸道样本进行采集,如鼻咽拭子、咽拭子、气管插管等。针对无症状患者可以进行血液样本采集、粪便样本或尿液样本采集。

采样具体方式

在样本采集时需要专业医护人员用经过经过消毒的采样棒、习惯进行取样。

在采集鼻咽拭子时,需要将采样棒插入鼻腔深处,旋转几次,在插入咽喉部,刮取黏膜物质。咽拭子样本采集,需要治安咽喉部轻轻刮取喉部黏膜物质。粪便样本采集需取粪便5克左右(约蚕豆粒大小)放置于经过消毒、干燥的密闭容器内。

(2)样本处理

对采集的样本进行处理时要根据样本具体状态,若样本相对较稀,则可以直接提取核酸进行检测;若样本相对较稠,则需要用生理盐水对样本进行稀释或离心处理,之后再对样本进行核酸提取。

(3)核酸提取

医生使用核酸提取试剂盒,依据试剂盒的使用说明对核酸进行提取。将处理完成后的样本提取至试剂盒中,采用离心、洗涤、干燥等环节提取出诺如病毒核酸。

(4)施行聚合酶链式反应(PCR)

在聚合酶链式反应(PCR)中,对诺如病毒核酸进行异性引物扩增基因片段的措施,现在扩增过程中增添荧光物质,借助荧光信号的反应实现对诺如核算病毒的检测。

(5)生成检测结果

在完成聚合酶链式反应(PCR)检测后,通过仪器自动分析检测物质中的荧光信号,依据信号的强度生成检测结果。根据检测结果的判定标准,判断样品中是否含有诺如病毒。

(6)生成检测报告

在检测结果生成后依据结果显示编写检测报告。报告中包含样本来源、采样方式、检测方法、检测结果等内容,重点对检测结果进行解释说明。在检测报告完成后需要进行审核,没有问题后方能交出。

(7)阳性病例确认

检测结果呈阳性的患者要进行核酸复检,并再次确认。对患者再次采集样本,调换核酸试剂盒进行核酸检测。通过复检可以排除假阳的可能性。若复检时再次确认为诺如病毒感染则可以确定该患者已经感染诺如病毒,要依据相关措施进行对应的防护处理和救治。

(8)严格控制实验室检测质量

为提高核酸检测结果的精准性需要对实验室的设备和仪器校准和维护,从而确保检测数据的真实性和精准性。对试剂盒等易消耗品进行质量检查,保障试剂盒的质量。同时对实验室的环境进行检测、控制,防止病毒的传递,保证检测环境的清洁、卫生。

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