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全自动酶免试验方法大全,建议收藏
2024-04-19 14:26:54
作者:范楠楠
作者单位:博山区疾病预防控制中心

随着科学技术水平的提高,全自动酶免试验在医学检验领域得到了有效应用,其主要是对抗体、抗原以及蛋白质等指标进行检测,可以对体液中特定抗体进行检测,比如病毒抗体等,在当前各项疾病的检查诊断以及感染筛查等领域方面得到了有效应用。那么全自动酶免试验的具体内容都有哪些呢?

一、分析全自动酶免试验的原理

此类实验主要是采取全自动酶免分析仪,结合酶与底物所出现的显色反应,对抗原、抗体等物质中的酶含量进行检验与分析。事实上,分光光度方式是全自动酶免分析仪的主要作用机制。光源灯所出现的光线,进行滤光片或者是单色器处理后,会成为一束单色光。此类单色光束会通过酶标板过程中的待测标本,其中的单色光束局部会被其中的标本所吸收,然后选择光电检测器进行检验,其会出现不同程度的光信号强弱。但是经过光电检测器,可以适当转变为不同大小的电信号。

此外全自动酶免分析仪在应用中,会将样品导入已经处理好的抗原或抗体酶标板微孔中,完成反应后进行清洗,将没有分离的配体清除。完成上述操作后,要加入酶分离物,完成孵育后,需要再次清洗,清除没有分离的化合物,加入酶底物加入。经过相关反应以后,形成有色的终产物,最后需要加入终止液,终止反应。需要注意的是,酶标板中各微孔吸光度,可以借助分光光度计中所设定的波长进行准确性读取;对于样品中被测物,其浓度值可以通过吸光度值以及规范曲线,实现有效计算出。

二、全自动酶免试验方法

(一)捕获法

若血清中存在特异性lgM、特异性lgG,lgG就会对lgM抗体造成影响,对其测定结构产生影响。基于此,对于lgM抗体测定主要选择捕获法,需要在固相对所有的血清lgM进行固定,并且去除lgG后,才可以对特异性lgM进行有效测定。首先需要在固相的载体上,对抗原lgM抗体进行连接,促进固相抗体lgM的形成。在此基础上,需要对血清标本进行稀释,慢慢加入,产生保温反应以后,固相抗体会获取lgM抗体,开展洗涤操作,然后清除免疫蛋白与血清中的杂质。其次,需要加入特异性抗原试剂,并且其会与固相中的特异性lgM进行有效结合、洗涤。完成上述操作后,需要加入特异性的酶标抗体,促进其与抗原反应的融合,并且还要进行洗涤处理。

(二)间接法

此试验方法是酶免检查中最为常见的方法,原理较为简单。主要是借助酶去标记抗体,应用所标记的抗体,实现对受检抗体的检测。在此操作中,需要加入酶标抗体,促进其与固相复合物内抗体的有效融合,导致酶间接性记在此类抗体上,完成洗涤以后,要注意对底物的适当加入,确保显色的有效性,以便更清晰地观察标本颜色的深度。

(三)双抗体夹心法

针对双抗体夹心法,主要是对各种蛋白质等较为大分子的抗原进行检测。然而,在选择双抗体夹心法对抗原进行检测时,一定要注意类风湿因子,避免其对实际的检测结果造成影响。

(四)竞争法

通过对竞争法的分析,发现其主要是对抗原进行测定,也可以测定抗体,不管是测定抗原,还是对抗体进行测定。此类的酶免法的具体检测步骤几乎都是一样的,需要不断优化与完善洗涤到加底物显色的过程。

(五)双位点一步法

此方法主要是对高亲和力的单克隆抗体进行测定。分析双位点一步法这种方式的优点,发现其各项操作不仅简单,还可以在最大程度上缩短反应时间。若应用酶免法,对艾滋病进行测定时,了解具体步骤后,自己应用测试盒在家进行测试就可以了。若应用此方式测定其他病毒抗体,需要到医院进行检测。当前酶免法检测方法较多,不同方式的作用效果不同,但其检测的正常值相同,只是对于不同的病原抗体,相关的操作方法存在差异性。

综上,与常规试验方式比较,全自动酶免试验的自动性更强,可以及时完成相关的试验操作。所以说当前全自动酶免试验已在国内外的疾病检验等多个领域得到了广泛应用,成为现阶段免疫检测中的主要方法之一,具有广阔的发展前景。

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