微生物检验作为临床常用的一种检验方法,可以帮助医生确定病人是否感染病原微生物,如细菌、病毒或是真菌;还可以确定病原微生物的敏感性和耐药性,从而避免在治疗过程中出现抗生素使用的耐药性问题,从而为后续诊治及治疗效果监测和预后评估提供积极帮助。本文针对微生物检验的基础知识和检验方法进行简单的介绍。
常见的微生物检验方法
1.细菌培养法:通过在适宜培养基上培养繁殖样本中的微生物体,来进行研究、鉴定和应用。为了获取良好的细菌培养物,在分离培养细菌时,除了选择适宜培养基外,还应将温度、酸碱度、湿度与气体等条件控制在最佳水平。对于混有多种细菌的临床标本或其他培养物,经过划线接种到固体培养基表面,因划线的分散作用,使许多原先混杂的细菌细胞在固体培养基表面散开,一般经过18~24小时培养后可得到单个菌落,供细菌计数和纯培养用,称为分离培养。挑选单个菌落,转种至另一培养基中,生长出来的细菌均为纯种,称为纯培养。分离纯培养是从标本中检查鉴定细菌非常重要的第一步,只有先从含有多种杂菌的标本中分离出目的菌纯培养,才能进一步对目的菌予以鉴定和研究。
2.快速诊断技术:近年来,随着微生物检验技术的不断发展,快速诊断技术逐步应用在各类疾病的诊断中,该方法可迅速取得准确结果,包括聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。快速诊断技术可通过特定基因序列或抗原-抗体间的相互作用,来实现检测目标微生物体或相关产物的效果,由于该方法具有较高的特异性与灵敏度,在流行病学调查、监测药物治疗效果与筛查早期感染情况上具有积极作用。
3.抗生素敏感性测试:检测病原微生物对抗生素的敏感性是临床微生物实验室的主要任务之一,包括纸片扩散法(Kirby-Bauer)和最小抑菌浓度法(MIC)等多种形式,该方法可有效检测出微生物对不同抗生素的耐药性与敏感性。抗生素敏感性测试通过在培养基上施加已知浓度的抗生素,并观察细菌在不同抗生素浓度下的生长情况,来确定其对抗生素的敏感程度,该方法可帮助医生选择合适的治疗方案。
微生物检验中常见标本类型及采集注意事项
1.血液标本:检验人员在采集受检者血液时,应严格按照无菌操作原则对采血部位进行规范清洁与消毒,按照检验目的对采血顺序与采血量进行合理控制以避免细菌交叉感染,采集的血液应立即注入消毒处理后的培养瓶,并迅速轻摇,使之充分混合,防止血液凝固。一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养。一般而言,采集血培养都应该在使用抗生素之前进行,推荐同时采2~3份血。采血结束后需及时送检,尽量避免对标本进行冷藏。
2.痰液标本:主要用于呼吸系统疾病的诊断。检验人员采集受检者痰液标本时,令其先用清水漱口,以自然咳痰法咳出深部痰液。采集时间选择在清晨,因为受检者经过一晚休息后,其痰液中的细菌数量相对较多。标本采集后应立即送检,以防细胞分解、细菌自溶。不能及时送检时,可暂时放置于4℃的冰箱中进行冷藏保存,但不能超过24小时。应连续送检3次,以提高检查的阳性率。标本采集时应采用无菌容器收集痰液,避免痰液污染容器外壁。检查过的标本应当灭菌后再处理,防止污染和疾病传播。
3.尿液标本:用无菌容器采集10mL晨尿的中段尿。采集前受检者应清洁外阴、生殖器避免混入分沁物或精液,以免造成污染影响检测结果的准确性。标本采集后应及时送检,不能及时送检则需对标本进行冷藏,冷藏时间不宜超过8小时,且部分检验项目无法进行冷藏。
4.粪便标本:选择含有异常成分的粪便,如黏液或脓血等病理成分为佳。采集到的粪便要避免与尿液混合,并根据检验目的对标本进行规范处理。