艾滋病(AIDS)是一种危害性极大的传染病,由感染艾滋病病毒(HIV)引起,是我国的乙类法定传染病。HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒,检测是知晓有无感染HIV的直接方法,那么,常见的HIV检测方法有哪些呢?
筛查试验
1.酶联免疫吸附试验(ELISA)。是HIV初筛实验室最常用、最主要的检测方法,多用于检测HIV抗体。试验通过血液(包含血清、血浆和滤纸干血斑)、尿液样品进行检测。该试验将HIV抗原包被于固相载体,加入待测样品和酶标记的抗体,通过加入底物显色,用酶标仪测定结果,与试剂盒的质控组对照进行结果判定。
2.化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA)。试验通过血液(包含血清和血浆)、尿液样品进行检测,既可检测HIV抗体,也可联合检测p24抗原。HIV第3代检测试剂可检测HIV抗体,HIV第4代检测试剂可同时检测HIV抗体和P24抗原,由于P24抗原产生于HIV感染早期,因此第4代试剂比第3代试剂缩短了“窗口期”,增加了早期发现HIV感染的机会。该试剂的HIV抗原/抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原/抗体,加入发光或荧光底物,用发光仪或荧光仪测定结果,与试剂盒的质控组对照进行结果判定。
3.HIV快速检测(RT)。是一种检测时间短(一般15~30分钟内可以出结果),不需要其他辅助设备便可以完成的检测方法,适合简便快速筛查。通过血液、口腔黏膜渗出液样品进行检测,包括免疫渗透试验(包括斑点ELISA、斑点免疫胶体金),免疫层析试验,明胶颗粒凝集试验(PA)。
确证检测试验
由于初筛试剂的高敏感性及相对弱的特异性,使初筛检测结果会出现假阳性,某些疾病的干扰也会造成出现假阳性结果,需进一步通过确证试验才能最终判定是否感染HIV,常用的确证试验也是一种HIV抗体检测方法。
1免疫印迹试验(WB)。是我国卫生部颁布《艾滋病检测技术规范》中唯一.目前国内HIV确诊试验的首选方法。该试剂的包膜上含有HIV的各类特异性抗原,包括膜区抗原gp160、gp120和gp41,核心抗原p55、p24和p17,聚合酶抗原p66、p51和p31,另外还有HIV-2型特异性抗原,试验通过血液(包含血清、血浆和滤纸干血斑)样品进行检测,若样品含有HIV抗体,就会与膜条上抗原带相结合,加入抗人-IgG酶结合物和底物后,根据出现条带情况进行结果判定。
2.免疫荧光。试验将感染HIV的细胞作为HIV抗原固定在玻片上,将待检血清加入玻片,如血清中含有HIV抗体,则可以形成抗原抗体复合物,加入荧光标记的抗人IgG,使抗原抗体复合物着色,通过荧光显微镜可观测到着色细胞。此方法操作简单,敏感度和特异性较ELISA高,但需要高倍荧光显微镜,并且在着色过程中存在非特异性的荧光着色难以去除,对结果判断有一定干扰。
核酸检测
HIV核酸检测直接检测血液中是否存在病毒核酸,诊断有无病原体感染,分为核酸定性检测和核酸定量检测,一般作为诊断HIV的辅助性检测手段。
1.核酸定性检测。该方法使用血浆、血清、组织器官或血液制品等检测HIV的RNA和DNA。国内生产的用于核酸检测试剂主要为Taqman实时荧光PCR检测试剂,通过Taqman实时荧光PCR扩增,检测靶基因为多聚酶区整合酶基因。
2.核酸定量检测。该方法基于靶核酸扩增RT-PCR和信号放大扩增两种方式,目前常用实时荧光定量RT-PCR靶核酸扩增试剂(荧光探针法)测定每毫升待测样品中病毒的拷贝数量(CPs/ml)。