目前，对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的检测均采用免疫学方法，最常用的是酶联免疫吸附试验（ELISA）。HBsAg酶联免疫法采用双抗体夹心法，该方法具有较高的灵敏度和特异性，但操作好、较为烦琐，耗时较长，只能定性。而且有时可能有检测错误（假阳性或假阴性）的情况，如高度溶血的样本，血液没有完全凝固的血清样本，有微生物污染的样本，使用叠氮钠防腐的样本，血清脂质过高，血液黏度过大等情况；洗板时洗涤液溢出，污染其他孔标本；实验过程孵育时间过长或温度过高；类风湿因子影响；服用某些药物等。此外有极少数不明原因的检测HBsAg假阳性。
    随着生物医学技术的不断发展与进步，电化学发光法因具有更高的敏感性，检测时间更短，有着更高的精密度及适用范围的特点，在临床上得到了更为广泛的使用。本实验室也引进了化学发光法检测乙肝两对半。但也存在一定的局限性。如异嗜性抗体或类风湿因子，溶血、脂血、或浑浊的样本等。
    另外，为了满足临床急诊快速出结果的要求，本实验室也开展乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测的胶体金法。该方法的优点是操作简单，出结果快速，20分钟即可发结果，试剂易保存，无须仪器设备，可随来随查。但只能用于定性，且灵敏度稍差，易出现假阴性。
不同方法学检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的灵敏度对比

当然，不同的试剂厂家，不同的检测系统，最低检出限也会有所不同。但总体来说，化学发光法灵敏度高于酶联免疫吸附法，金标法的灵敏度最低。所以不同的检测方法也可能导致检验结果的不一致。因化学发光法灵敏度高，极少数注射乙肝疫苗后也可能检测出乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。乙肝的诊断定应根据流行病学、临床症状和体征、实验室检查和（或）肝活体组织学检查等手段进行综合分析，并根据动态观察做出诊断。长沙山水医学检验实验室开展相关检测项目：
乙肝表面抗原定性：HBsAg
乙肝两对半定性：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb
乙肝三对定性：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBe⁃Ab、HBcAb、HBcAb-IgM
乙肝两对半定量：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb
乙肝DNA定量：HBV-DNA
肝功能全套：TP、ALB、GLB、A/G、TBIL、DBIL、IBIL、ALT、AST、AST/ALT、TBA、ALP、GGT、CHE
肿瘤标志物：AFP、CEA、甲胎蛋白异质化比率、AFU